Protocolo de extracción de ADN en lotes de 10 mosquitos para la identificación de Plasmodium spp. mediante qPCR / Protocol for DNA extraction in batches of 10 mosquitoes for the identification of Plasmodium spp. thorough qPCR

Las tropas que despliegan en zonas de operaciones endémicas de malaria, necesitan de una información precisa del riesgo sanitario para la toma de decisiones acerca de las medidas de prevención más adecuadas. El estado de portador de un mosquito se determina clásicamente por la presencia o ausencia de esporozoitos de Plasmodium spp. en las glándulas salivales. Los protocolos basados en la amplificación del ADN en tiempo real (qPCR) son muy sensibles, sin embargo existen dificultades en la qPCR debido a inhibidores presentes en los tejidos del mosquito, lo que obliga a trabajar de uno en uno. En este trabajo se diseña una qPCR para amplificar una región conservada entre mosquitos de diferentes especies y otros dípteros, con el objetivo de comparar varios protocolos de extracción de ADN y determinar el más eficiente a la hora de procesar lotes de 10 mosquitos (AU)

Troops deployed in operational areas where malaria is endemic, need accurate information on the health risk for this disease to make decisions about the most appropriate prevention measures. The carrier status of a mosquito is classically determined by the presence or absence of sporozoites of Plasmodium spp. in the salivary glands. Protocols based on DNA amplification in real time (qPCR) are very sensitive, however there are difficulties in qPCR due to inhibitors present in tissues of the mosquito, therefore it is necessary to work one by one. In this paper we design a qPCR to amplify a preserved region among different species of mosquitoes and other Diptera, in order to compare various DNA extraction protocols to determine the most efficient one when processing batches of 10 mosquitoes (AU)

Plan de vigilancia entomológica en zona de operaciones. Aproximación al estudio de anofelinos (Diptera: Culicidae) y riesgo entomológico asociado en las bases de Herat y Qala I Naw / Entomological surveillance program in area of operations: approach to the study of anopheline (Diptera: Culicidae) and entomological risk at the bases of Herat and Qala i Naw

Introducción: Cualquier información obtenida para contribuir a la evaluación del riesgo de aparición de brotes de malaria en la fuerza desplegada en zonas de operaciones es de máximo interés para los servicios de medicina preventiva. Tras un estudio piloto de vigilancia entomológica, realizado en la base de Herat (Afganistán) en 2008, se han realizado ahora nuevos estudios protocolizados y con más medios en dicha base, así como en la situada en Qala i Naw (Afganistán). Material y métodos: Entre junio y octubre de 2010 se realizaron muestreos entomológicos en las bases de Herat y Qala i Naw, empleando trampas luminosas de succión tipo mini CDC con luz blanca y ultravioleta, así como una trampa de succión tipo BG-Sentinel de BioGents GmbH con atrayente químico. Las hembras de anofelinos se analizaron mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en busca de su posible infección por Plasmodium spp. Resultados: Se capturaron culícidos pertenecientes a diversos géneros, entre ellos del género Anopheles. Todas las hembras de anofelinos fueron analizadas mediante PCR a tiempo real, siendo todas negativas a Plasmodium spp. Discusión: Entre los ejemplares capturados, Anopheles hyrcanus es un potencial vector de malaria en la zona. Dada su presencia en la base de Herat, habría que valorar la posible existencia de reservorios de Plasmodium spp. en las zonas habitadas cercanas a la misma, y la influencia de factores externos, tales como los vientos predominantes en esa región, que pueden empujar a los mosquitos infectados hacia la base, desde esas zonas. Con los resultados obtenidos se puede establecer un protocolo sencillo de evaluación del riesgo de padecer malaria detectando mosquitos portadores potenciales (riesgo medio) y reales (riesgo alto) (AU)

Introduction: Any information obtained to contribute to the assessment of the risk of malaria outbreaks in the force deployed in area of operations is of greatest interest to preventive medicine services. Following a pilot study of entomological surveillance, carried out at the base of Herat (Afghanistan) in 2008, further protocolised research was recently performed also in Qala i Naw base. Material and methods: Between June and September 2010 an entomological survey took place at the bases of Herat and Qala i Naw (Afghanistan), using for the purpose CDC traps with white and ultraviolet light, as well as a Sentinel trap type with specific chemical attractant BG-Lure®. The females of Anopheles were analysed with the real-time polymerasa chain reaction (PCR) in order to look for the possible infection with Plasmodium spp. Results: Mosquitoes belonging to various genera were captured. All anopheline females were analysed by real-time PCR and all of them were negative to Plasmodium spp. Discussion: Among the captured specimens, Anopheles hyrcanus is a potential vector of malaria in the area. Due to its presence in the base of Herat, we should assess the possible presence of reservoirs of Plasmodium spp. in inhabited areas close to the base, as well as the influence of external factors, such as prevailing winds in this region that could drive infected mosquitoes toward the base from those areas. With the obtained results we could establish a simple protocol to assess the risk of malaria, detecting potential vectors (medium risk) and real vectors (high risk) (AU)